روش, بررسی بیان ژن با روش ریل تایم پی سی آر (real time pcr)

تکنیک Real Time PCR بسیار شبیه به روش PCRمی باشد و در ریل تایم نیز همانند PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، یک توالی تکثیر می گردد. اما تفاوت ریل تایم با PCR معمولی در سنجش کمی توالی تکثیر شده می باشد. در روش ریل تایم با به کار گرفتن یک نشانگر فلورسنت در واکنش، میزان تکثیر محصول ردیابی می گردد. این نشانگرهای فلورسنت به گونه‌ ای طراحی می‌شوند که در صورت تکثیر DNA ، با اتصال آن ها به DNA نور تولید کنند. بنابراین نور بیشتر برابر است با تکثیر محصول و افزایش شدت نور ثبت شده در دستگاه با میزان محصول بدست آمده نسبت مستقیم دارد.

اصول real time pcr : سنجش میزان بیان ژن ها با تکنیک ریل تایم به چه صورت می باشد؟

روش ریل تایم به دو دسته تقسیم بندی می شود:

روش اول: استفاده از نشانگرهای فلورسنت غیر اختصاصی با استفاده از رنگ های باند شده بهDNA مانند (SYBR® Green) و یا اوا گرین (Eva green)

در این روش از رنگ های متصل شوند به DNA دو رشته ای........